پرسش و پاسخ در زمینه دستگاه ترمال سایکلر (PCR)-شناسا پرتو ژن

پرسش و پاسخ در زمینه دستگاه ترمال سایکلر (PCR)

 

چرا دستگاه PCR را یک چرخه حرارتی می نامند؟

کل فرآیند PCR خودکار است و تنها در چند ساعت تکمیل می‌شود. این دستگاه توسط دستگاهی به نام ترموسایکلر هدایت می شود که به گونه ای برنامه ریزی شده است که دمای واکنش را هر چند دقیقه تغییر دهد تا امکان دناتوره شدن و سنتز DNA را فراهم کند

 

چرخه حرارتی در PCR چیست؟
فرآیند واقعی PCR از طریق چرخه حرارتی انجام می شود، فرآیندی از گرمایش و خنک کردن که شرایط لازم برای همانندسازی DNA را ایجاد می کند. چرخه حرارتی برای PCR شامل سه مرحله است – دناتوره کردن، اتصال و گسترش.

 

یک ترمال سایکلر  PCR چقدر است؟

هزینه دستگاه PCR بسته به نیاز شما می تواند بسیار متفاوت باشد. یک دستگاه PCR پایه می تواند تا 5000 دلار قیمت فهرست داشته باشد، در حالی که سیستم های پیشرفته RT-PCR یا qPCR می توانند از 15000 دلار تا بیش از 90000 دلار متغیر باشند.

 

سه مرحله PCR چیست؟

سه مرحله PCR

• مرحله اول: دناتوره سازی در این مرحله اول واکنش PCR، جداسازی کامل دو رشته DNA از نمونه هدف که باید تکثیر شود، صورت می‌گیرد.
• فاز دوم: هیبریداسیون پرایمرها.
• مرحله سوم: گسترش رشته DNA جدید.

 

4 مرحله PCR چیست؟

فرآیند PCR دارای 4 مرحله است: جمع آوری، آماده سازی، تقویت و پاکسازی پس از PCR

 

اصل تکنیک ترمال سایکلر چیست؟

اصل آن مبتنی بر استفاده از DNA پلیمراز است که همانندسازی در شرایط آزمایشگاهی توالی های DNA خاص است. این روش می‌تواند ده‌ها میلیارد نسخه از یک قطعه DNA خاص (توالی مورد علاقه، DNA مورد علاقه یا DNA هدف) را از یک عصاره DNA (الگوی DNA) تولید کند.

 

دستگاه ترمال سایکلر برای چه مواردی استفاده می شود؟

تست های PCR (واکنش زنجیره ای پلیمراز) روشی سریع و بسیار دقیق برای تشخیص برخی بیماری های عفونی و تغییرات ژنتیکی است. این آزمایش ها با یافتن DNA یا RNA یک پاتوژن (ارگانیسم عامل بیماری) یا سلول های غیر طبیعی در یک نمونه کار می کنند.

 

آیا می توان PCR را بدون ترمال سایکلر انجام داد؟

تعدادی از تغییرات در تکنیک RT-PCR در حال حاضر وجود دارد از جمله TaqMan PCR (آزمایش نوکلئاز 5)، که یک روش تشخیص غیر ایزوتوپی مفید برای تعیین کمیت محصولات PCR است. برای نظارت بر شکل‌گیری این محصولات تقویت‌کننده فلورسنت، معمولاً به یک سیکلر حرارتی “ریل تایم” نیاز است.

 

منظور از ترمال سایکلر چیست؟

تنش هایی مانند چرخه حرارتی، که در آن تراشه ها به طور مکرر از دمای بسیار پایین (تا 160- درجه سانتیگراد) به دمای بالا (تا 300 درجه سانتیگراد) چرخه می شوند، برای آزمایش انعطاف پذیری دستگاه در برابر تفاوت های انبساط حرارتی یا سایر ساختارهای ساختاری ابداع شده اند.

 

چرا PCR 30 بار تکرار می شود؟

این چرخه معمولاً 30 بار تکرار می شود. هر قطعه DNA جدید می تواند در چرخه بعدی به عنوان یک الگوی جدید عمل کند، بنابراین پس از 30 چرخه، می توان 1 میلیون نسخه از یک قطعه DNA تولید کرد (Scheme – Diagram of PCR). PCR دو مشکل جهانی تر در شیمی اسیدهای نوکلئیک طبیعی را حل می کند.

 

چرا در دستگاه ترمال سایکلر از گرما استفاده می شود؟

DNA پلیمراز این باکتری در دماهای بالا بسیار پایدار است، به این معنی که می تواند دمای مورد نیاز برای شکستن رشته های DNA را در مرحله دناتوره شدن PCR تحمل کند.

 

انواع مختلف PCR چیست؟

انواع PCR

• Multiplex PCR. Multiplex PCR از جفت پرایمرهای مختلف در یک واکنش برای تقویت همزمان چندین هدف استفاده می کند. …
• PCR با برد بلند.
• PCR تک سلولی
• PCR با چرخه سریع
• PCR اختصاصی متیلاسیون (MSP)
• Hot start PCR.
• PCR با کیفیت بالا
• RAPD: تجزیه و تحلیل سریع DNA چند شکلی تقویت شده.

 

چرا دستگاه های PCR مهم هستند؟

PCR همچنین در تعدادی از تکنیک های آزمایشگاهی و بالینی از جمله انگشت نگاری DNA، تشخیص باکتری یا ویروس (به ویژه ایدز) و تشخیص اختلالات ژنتیکی ارزشمند است.

 

 ترمو سایکلر برای چه مواردی استفاده می شود؟

پس از تکثیر، DNA تولید شده توسط PCR می تواند در بسیاری از روش های آزمایشگاهی مختلف مورد استفاده قرار گیرد.

 

آیا qPCR گران است؟

هزینه یکی از این آزمایش‌ها: 50 یورو (یا 85.78 دلار آمریکا) با استفاده از سیکلر qPCR 96 چاهک – 96 واکنش (0.72 یورو / 0.89 دلار در هر واکنش) 60 یورو (یا 167.86 دلار آمریکا) با استفاده از سیکلر qPCR 384 چاهک – 384 واکنش ( 0.36 یورو / 0.44 دلار در هر واکنش)

 

چرا از بافر در PCR استفاده می شود؟

PCR در بافری انجام می شود که محیط شیمیایی مناسبی را برای فعالیت DNA پلیمراز فراهم می کند. pH بافر معمولاً بین 8.0 تا 9.5 است و اغلب توسط Tris-HCl تثبیت می شود. برای Taq DNA پلیمراز، یک جزء مشترک در بافر، یون پتاسیم (K+) از KCl است که بازپخت پرایمر را تقویت می کند.

 

پرایمرهای PCR چیست؟

پرایمرهای PCR قطعات کوتاهی از DNA تک رشته ای هستند که معمولاً حدود 20 نوکلئوتید طول دارند. در هر واکنش PCR از دو پرایمر استفاده می‌شود و به گونه‌ای طراحی شده‌اند که ناحیه مورد نظر (منطقه‌ای که باید کپی شود) کنار هم قرار گیرند.

 

چرا Taq polymerase در PCR استفاده می شود؟

استفاده از یک DNA پلیمراز ترموفیل مانند Taq polymerase از دناتوره شدن آنزیم در طول مرحله گرمایش که برای جداسازی رشته جدید سنتز شده ضروری است جلوگیری می کند – این متعاقباً تکنیک PCR را ساده می کند و کارایی آن را افزایش می دهد.

 

چند سیکل PCR وجود دارد؟

تعیین تعداد چرخه PCR

تعداد چرخه ها معمولاً 25 تا 35 بار انجام می شود، اما ممکن است بر اساس مقدار ورودی DNA و بازده مورد نظر محصول PCR متفاوت باشد. اگر ورودی DNA کمتر از 10 نسخه باشد، ممکن است تا 40 چرخه برای تولید بازده کافی لازم باشد.

 

6 مرحله PCR چیست؟

در زیر یک پروفایل معمولی ترموسایکلر PCR است.

• مقداردهی اولیه. در این مرحله، واکنش به مدت 30 ثانیه تا چند دقیقه در دمای 94-96 درجه سانتیگراد گرم می شود.
• دناتوراسیون (تکرار 15 تا 40 بار)
• اتصال (تکرار 15 تا 40 بار)
• ازدیاد طول یا امتداد (تکرار 15 تا 40 بار)
• و تکرار
• کشیدگی نهایی
• برگزاری نهایی.

 

هزینه یک ترمال سایکلر چقدر است؟

یک دستگاه PCR ساده مانند ترمال سایکلر Bio-Rad T100 دارای لیست قیمت 4912 دلار (با قیمت تبلیغاتی 2595 دلار در ایالات متحده) از 30 ژانویه 2019 است. هزینه سیستم های rtPCR برای برخی از RotorGene از 15000 دلار متغیر است. مدل های بیش از 90000 دلار برای QuantStudio 12k.

 

چگونه از PCR برای شناسایی باکتری ها استفاده می شود؟

اصل روش ساده است. هنگامی که یک محصول خالص PCR از ژن 16S بدست می آید، توالی یابی شده و در برابر پایگاه داده DNA باکتری قرار می گیرد، آنگاه می توان باکتری را شناسایی کرد. تایید هویت ممکن است دنبال شود.

 

چه کسی ترموسایکلر را اختراع کرد؟

این تکنیک توسط کری مولیس در دهه 1980 توسعه یافت و در نتیجه در سال 1993 جایزه نوبل شیمی را دریافت کرد.

 

اجزای اصلی PCR چیست؟

به طور کلی، یک واکنش کامل PCR به پنج معرف اصلی PCR نیاز دارد. الگوی DNA/RNA، DNA پلیمراز، پرایمرها (به جلو و معکوس)، تری فسفات های دئوکسی نوکلئوتید (dNTPs) و بافرهای PCR.

 

چند نوع تکنیک PCR وجود دارد؟

2 اصلی

2 روش اصلی وجود دارد: PCR با رنگ های dsDNA و PCR با پروب.

 

دستگاه مشابه:جهت مشاهده فروشگاه دستگاه ترمال سایکلر لطفا کلیک فرمایید.

 

 

محدودیت های PCR چیست؟

محدودیت های تکنولوژی PCR چیست؟

• PCR نمی تواند برای تقویت اهداف ناشناخته استفاده شود. اطلاعات قبلی در مورد توالی هدف برای طراحی پرایمرها ضروری است.
• DNA پلیمرازها مستعد خطا هستند که به طور بالقوه باعث جهش در محصولات PCR می شود.
• PCR به آلودگی بسیار حساس است.

 

آیا از PCR در تعیین توالی DNA استفاده می شود؟

بخش‌های DNA خاصی که توسط توالی دو الیگونوکلئوتید تعریف می‌شوند را می‌توان با استفاده از واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) به صورت آنزیمی تا یک میلیون برابر تقویت کرد. یکی از مهمترین کاربردهای این تکنیک برای تولید الگوهای توالی یابی، چه از درج های کلون شده یا مستقیماً از DNA ژنومی است.

 

4 کاربرد مهم PCR چیست؟

ما یک بررسی از کاربردهای زیر از PCR ارائه می کنیم: 1) تکثیر قطعات ژن به عنوان جایگزین سریع شبیه سازی. 2) اصلاح قطعات DNA. 3) تشخیص حساس میکروارگانیسم های بیماری زا، در صورت تمایل و به دنبال آن یک ژنوتیپ دقیق. 4) تجزیه و تحلیل DNA نمونه های باستان شناسی.

 

چگونه از  دستگاه ترمال سایکلر در زندگی واقعی استفاده می شود؟

در کشاورزی، PCR نقش مهمی در تشخیص بیماری‌زای غذایی، ژنوتیپ گیاهی برای اصلاح نژاد و آزمایش GMO ایفا می‌کند. در نتیجه، از زمان معرفی آن در دهه 1980، PCR همچنان یک ابزار مفید با کاربردهای گسترده در زیست شناسی کشف، تشخیص پزشکی، پزشکی قانونی و کشاورزی است.

 

cDNA چه مدت در 4 درجه پایدار است؟

نمونه های DNA ذخیره شده در دمای 4 درجه سانتی گراد و RT درجات مختلفی از تبخیر را نشان دادند اما DNA تا 12 ماه در دمای 4 درجه سانتی گراد پایدار بود. نمونه های ذخیره شده در دمای اتاق به مدت 6 ماه کاملاً تبخیر شدند.

 

نمونه PCR برای چه مدت مفید است؟

بیان شده است که اگر سواب در محیط انتقال ویروس (VTM) باشد، نمونه را می توان در دمای 4 درجه سانتیگراد یا بین 2 تا 8 درجه سانتیگراد تا 4 یا 5 روز نگهداری کرد.

 

آیا می توانید دو بار PCR را اجرا کنید؟

بله، باید کار کند. اگر در اولین واکنش خود محصول PCR خوبی دارید، می توانید از محصول به عنوان هدف برای واکنش دیگر استفاده کنید، اما اگر با اولین PCR خود مشکل دارید، توصیه نمی شود.

 

چه چیزی باعث چرخه حرارتی می شود؟

همانطور که قبلا ذکر شد، نیروی محرکه اصلی برای آسیب چرخه حرارتی عدم تطابق در CTEs بین فیبر و ماتریس است. عدم تطابق CTE باعث ایجاد یک میدان تنش داخلی با حداکثر در اطراف رابط فیبر-ماتریس می شود، از این رو منجر به تسلیم ماتریس در اطراف فیبر می شود.

 

تفاوت شوک حرارتی و ترمال سایکلر چیست؟

آزمایش شوک حرارتی تعیین می کند که آیا محصول الکترونیکی مورد آزمایش قادر به مقاومت در برابر تغییرات دمایی ناگهانی است یا خیر. آزمایش ترمال سایکلر برای شناسایی مکانیسم‌های شکست ناشی از عدم تطابق در ضریب انبساط حرارتی (CTE) مواد انجام می‌شود.

 

فواید گرما درمانی چیست؟

گرما درمانی برای تسریع بهبود و بهبودی شناخته شده است و برخی از پزشکان آن را به بیمارانی که از آسیب، درد مزمن، روماتیسم و ​​آرتریت رنج می برند توصیه می کنند. برخی از مطالعات نشان می دهد که گرما درمانی همچنین ممکن است یک درمان موثر در درمان افسردگی خفیف، کاهش اشتها و بی اشتهایی باشد.

 

چرا دمای  اتصال در PCR مهم است؟

در طول مرحله اتصال PCR، دمای واکنش باید به اندازه کافی پایین باشد تا پرایمرهای رو به جلو و معکوس بتوانند به قالب متصل شوند، اما نه آنقدر پایین که امکان تشکیل دوبلکس های نامطلوب، غیر اختصاصی یا گیره های موی درون مولکولی، هر دو را فراهم کند. که کارایی واکنش را کاهش می دهند.

 

در 55 درجه در PCR چه اتفاقی می افتد؟

برنامه اصلی PCR

پرایمرهای آنیل به مدت 30 ثانیه در دمای 55 درجه سانتیگراد: پرایمرهای رو به جلو و معکوس در این محدوده دما برای اتصال به هر یک از رشته های الگوی DNA تک رشته ای پایدار هستند. DNA پلیمراز همچنین به اندازه کافی پایدار است که اکنون به دنباله DNA پرایمر متصل شود.

 

بهترین دمای اتصال برای PCR چیست؟

دمای اتصال پروتکل استاندارد PCR یا 55 درجه سانتیگراد یا 60 درجه سانتیگراد است. دمای انتخاب شده به دمای ذوب رشته پرایمرها و ویژگی مورد نظر بستگی دارد. برای سختی بیشتر دماهای بالاتر توصیه می شود

 

دمای اتصال چقدر است؟

محدوده دما برای اتصال فرآیند از 260 درجه سانتیگراد (500 درجه فارنهایت) تا 760 درجه سانتیگراد (1400 درجه فارنهایت) بسته به آلیاژ مورد نظر متغیر است. این فرآیند عمدتاً برای فولاد کم کربن مناسب است. این ماده تا دمایی درست زیر دمای بحرانی پایین‌تر فولاد گرم می‌شود.

 

PCR برد بلند چیست؟

PCR برد بلند به تقویت اهداف DNA با طول بیش از 5 کیلوبایت اشاره دارد که معمولاً با استفاده از روش‌ها یا معرف‌های معمول PCR قابل تقویت نیستند.

 

چرا برای PCR دو پرایمر لازم است؟

پرایمر فوروارد به DNA الگو متصل می شود، در حالی که پرایمر معکوس به رشته مکمل دیگر متصل می شود که هر دو در واکنش PCR تقویت می شوند. اگر فقط از یک پرایمر استفاده شود، این فرآیند “PCR نامتقارن” نامیده می شود

 

دستگاه qPCR چقدر است؟

TC10™ برای 2500 دلار، قیمت معمولی 3995 دلار. T100 و C1000 Touch™ با ماژول های حرارتی واکنش سریع 96 چاهک به قیمت 8700 دلار، قیمت معمولی 12990 دلار.

 

پرایمرهای qPCR چقدر هستند؟

 

سنجش پرایمر PrimeTime qPCR در لوله ها

	تعداد واکنش ها (20 میکرولیتر)	قیمت
پرایمرهای qPCR PrimeTime	500	52.00 دلار آمریکا

 

 

جهت مشاوره و خرید انواع تجهیزات آزمایشگاهی با مشاوران واحد فروش شرکت شناساپرتوژن ۷۵۳۱۱ – ۰۲۱ در ارتباط باشید