مزایای فیلتر کردن حلال های فاز متحرک HPLC
در آنالیز HPLC از مایعات به عنوان حامل برای انتقال نمونه ی تزریق شده به ستون و سپس به آشکارساز استفاده می شود. چنین حاملی می تواند یک مخلوط آبی – آلی، یا آلی – آلی از یک بافر در ترکیب با یک حلال آلی باشد.
این مسئله حائز اهمیت است که پیش از انتخاب حلال های فاز متحرک برای آنالیز، قابلیت امتزاج پذیری کامل آن ها را بررسی کنید و هم چنین از این موضوع مطمئن شوید که آن ها در مخلوط با یکدیگر واکنش نشان نمی دهند. چنانچه این روش انالیز در جایی ثبت نشده باشد، یک مخلوط ساده از حلال ها را در یک تیوب تست بسازید تا بتوانید هر دو شرایط را در ان تایید نمایید.
بیشتر بخوانید: آنالیز فلزات در مواد غذایی با دستگاه جذب اتمی
فرآیند جداسازی HPLC
حلال های درجه HPLC برای استفاده در فرآیند جداسازی HPLC توسط دستگاه hplc مورد تایید قرار گرفته اند. حتی اگر میزان اندکی از حلال را در یک لیوان شیشه ای آزمایشگاه بررسی کنید، آن را به صورت کاملا شفاف خواهید دید که برای استفاده ی مستقیم مناسب است. با این حال، باید در نظر داشت که ذرات معلق یا ناخالصی های موجود در طیف اندازه ی میکرونی به سختی توسط چشم غیر مسلح دیده می شوند. چنین ذراتی در صورت عدم حذف در دراز مدت بر عملکرد سیستم HPLC تأثیر می گذارند.
انجام اقدامات احتیاطی اساسی در بررسی و استفاده از فاز متحرک HPLC، باعث بالا رفتن سطح تکرارپذیری و دقت نتایج آنالایتیکی می شود. در نظر داشته باشید که آب نیز یکی از اجزای اساسی مخلوط های فاز آبی متحرک است. کیفیت آب مورد استفاده نیز باید مطابق با استانداردهای تعیین شده باشد. مقاله ی قبلی در مورد کیفیت مناسب آب برای آنالیز HPLC یک مرجع مفید در این زمینه است.
حتی اگر شما حلال های مورد نیاز خود را از تأمین کنندگان مشهوری تهیه کرده باشید و اقدامات احتیاطی لازم را برای اطمینان از انحلال کامل نمک بافر انجام داده باشید، باز هم ضروری است اجزای فاز متحرک را پیش از استفاده فیلتر کنید. مواد به صورت ذرات معلق ریز می توانند در داخل ستون تجمع یابند که باعث ایجاد پس فشار می شود و از این طریق روی سرعت جریان تاثیر می گذارد و اجزای پمپ را تخریب می کند. در بدترین حالت، فاز متحرک به اتصالات نشت پیدا می کند که با توقف فرآنید آنالیز همراه خواهد بود. حالا این سؤال پیش می آید که چگونه می توان بروز چنین مواردی را به حداقل رساند.
برای غلبه بر چنین شرایطی راهکارهایی ارائه شده است:
- پس از اماده کردن مخلوط فاز متحرک، با یک فیلتر بااندازه ی 45/0 میکرون آن را در خلا فیلتر کنید.
- همواره از فاز متحرک تازه که پیش از مصرف، آماده شده است، استفاده کنید. اگر چنین امکانی میسر نیست، حداقل ناخالصی های معلق قابل مشاهده یا رشد باکتری ها را بررسی کنید. در چنین مواردی پیشنهاد می شود فاز متحرک دور ریخته شود و مجددا تهیه شود.
- از فیلترهای آنلاین در بطری های حلال HPLC استفاده کنید تا هر ذره ی معلقی با اندازه ی کمتر از 10 میکرون جدا شود. هر از گاهی فیلترها را با سونیکاسیون تمیز کنید.
- نمونه و محلول های استاندارد را پیش از جمع آوری در ویال ها قبل از تزریق فیلتر کنید.
- از ستون های محافظ استفاده کنید.
